食品添加劑ε-聚賴氨酸鹽酸鹽從淀粉酶產色鏈霉菌(Streptomyces. diastatochromogenes)受控發酵培養液經離子交換樹脂吸附、解吸、提純而來，可作為防腐劑用于水果、蔬菜、豆類、食用菌、大米及制品、小麥粉及其制品、雜糧制品、肉及肉制品、調味品、飲料類。國家衛生計生委于2014年4月3日2014年第5號公告《關于批準ε-聚賴氨酸等4種食品添加劑新品種等的公告》批準ε-聚賴氨酸為食品添加劑新品種。

ε-聚賴氨酸鹽酸鹽

ε-poly-L-lysine?HCl

防腐劑

從淀粉酶產色鏈霉菌(Streptomyces. diastatochromogenes)受控發酵培養液經離子交換樹脂吸附、解吸、提純的食品添加劑ε-聚賴氨酸鹽酸鹽。

感官要求應符合表1的規定。

表1 感官要求

理化指標應符合表2的規定。

表2 理化指標

試驗方法規定的一些試驗過程可能導致危險情況。操作者應采取適當的安全和防護措施。

本標準所用試劑和水，在沒有注明其他要求時，均指分析純試劑和GB/T 6682中規定的三級水。試驗中所用標準滴定溶液、雜質測定用標準溶液、制劑及制品，在沒有注明其他要求時，均按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603的規定制備。試驗中所用溶液在未注明用何種溶劑配制時，均指水溶液。

A.3.1.1 堿性硝酸鉍溶液:堿性硝酸鉍0.85 g加乙酸10 mL及水40 mL溶解。

A.3.1.2 碘化鉀溶液:碘化鉀8 g加水20 mL溶解。

A.3.1.3 Dragendorf試液:堿性硝酸鉍溶液5 mL、碘化鉀溶液5 mL、乙酸20 mL和水100 mL混合而成。現用現配。

A.3.1.4 pH 6.8的0.1 mol/L磷酸緩沖溶液。

A.3.1.5 甲基橙試液:0.1 mmol/L。

A.3.1.6 正丁醇/水/冰乙酸溶液:(4:2:1)。

A.3.1.7 茚三酮的丙酮溶液:1→50。

A.3.2.1 0.1%試樣液1 mL加Dragendorf試液1 mL，應產生紅褐色沉淀。

A.3.2.2取試樣0.1 g溶于pH6.8的0.1 mol/L磷酸緩沖溶液100 mL中，取試樣溶液1 mL，加甲基橙試液1 mL，應產生紅褐色沉淀。

A.3.2.3參照GB/T5009.124方法將試樣水解成單一氨基酸，制成含本品約1 mg/mL的近中性水溶液，作為試樣溶液;精密稱取賴氨酸鹽酸鹽標準樣品適量，加水稀釋成1 mg/mL的溶液，作為標準溶液;另取試樣適量，制成含試樣約1 mg/mL的水溶液，作為對照液;另取賴氨酸鹽酸鹽標準樣品與精氨酸標準樣品各適量，置于同一量瓶中，用水溶解并稀釋成0.4 mg/mL的溶液，作為系統適用性試驗溶液。按照薄層色譜法(《中國藥典》附錄V B)試驗，吸取上述四種溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇/水/冰乙酸溶液為展開劑，展開液由原始線上升高于10 cm處時，晾干，90 ℃干燥10 min，噴以茚三酮的丙酮溶液，90℃加熱至斑點出現，立即檢視。標準溶液應顯示一個清晰斑點;系統適應性試驗溶液應顯示兩個完全分離的斑點，且其中一個斑點與標準溶液斑點色澤相似，Rf值相等;試樣溶液所得斑點與標準溶液所示斑點，色澤相似，Rf值相等。對照液應在原點處顯示一個清晰斑點，沒有其它斑點出現。

利用高效液相色譜測定ε-聚賴氨酸鹽酸鹽的含量。

A.4.2.1 磷酸氫二鉀。

A.4.2.2 硫酸鈉。

A.4.2.3磷酸。

A.4.2.4乙腈。

高效液相色譜儀:配有紫外檢測器，或其他等效的檢測器。

A.4.4.1 檢測波長:215 nm;

A.4.4.2 色譜柱:C18色譜柱，柱為4.6 mm×250 mm。或其他等同分離效果的色譜柱和色譜條件。

A.4.4.3 流速:0.4 mL/min;

A.4.4.4 定量進樣器100 μL。

A.4.5.1 流動相的制備

將1.7 g的磷酸氫二鉀和1.42 g的硫酸鈉溶于800 mL的水中，用磷酸調pH至3.4后，用水定溶至1000 mL，取此溶液920 mL加入80 mL乙腈，混勻。用0.45 μm的膜過濾器過濾。

A.4.5.2 標準樣品溶液的制備

精確稱量約20.00 mg ε-聚賴氨酸鹽酸鹽標準樣品，加入到25 mL的容量瓶中，加流動相到刻度下1 cm處超聲10 min，待冷至室溫用流動相定容至刻度混合均勻。將此溶液用0.45 μm的膜過濾器過濾，待用。

A.4.5.3 試樣溶液的制備

精確稱量約20.00 mg試樣，加入到25 mL的容量瓶中，加流動相到刻度下1 cm處超聲10 min，待冷至室溫用流動相定容至刻度混合均勻。將此溶液用0.45 μm的膜過濾器過濾，待用。

A.4.5.4測定

分別向液相色譜儀注入標準樣品溶液和試樣溶液，記錄主峰的峰面積，進樣量為20 μL。

ε-聚賴氨酸鹽酸鹽含量(以干品計)的質量分數w1，按公式(A.1)計算:

w1 = [(Ws × Ps / Wu) (Ru / Rs)×100 %]÷(1-w2)………………(A.1)

式中:Ws--制備標準樣品溶液所用的ε-聚賴氨酸鹽酸鹽標準樣品的質量(mg);

Ps--制備標準樣品溶液所用的ε-聚賴氨酸鹽酸鹽標準樣品含量(%);

Wu--試樣溶液中試樣的質量(mg);

Rs--標準樣品溶液中主峰面積的響應值;

Ru--試樣溶液中主峰面積的響應值;

w2--A.5中測得的干燥減量的質量分數。

注:系統適用性為重復注入標準樣品溶液三次，所得響應面積的相對平均偏差小于1.0%。

按GB 5009.3中的第一法，直接干燥法進行測定。